Среда агар питательный для выделения листерий пал. Питательный агар для культивирования и выделения листерий (среда ПАЛ) набор. Учет и регистрация результатов

ИНСТРУКЦИЯ

по применению набора реагентов для бактериологических исследований

«Питательный агар для выделения листерий (Среда ПАЛ)»

1. НАЗНАЧЕНИЕ

Набор реагентов «Питательный агар для выделения листерий (Среда ПАЛ)» предназначен для выделения листерий из клинического материала и пищевых продуктов при их бактериологическом исследовании.

2. характеристика НАБОРА

Набор реагентов состоит из одной банки со средой ПАЛ и 5 флаконов с селективной добавкой (СД). *)

Среда ПАЛ представляет собой мелкодисперсный порошок светло-желтого цвета, который получают смешиванием сухих компонентов. Порошок гигроскопичен, светочувствителен.

СД представляет собой мелкодисперсный порошок розового цвета. Порошок гигроскопичен, светочувствителен.

Среда ПАЛ выпускается в полиэтиленовых банках по 250 г, СД во флаконах по 0,045 г.

2.1. Принцип действия

Выделение листерий основано на их способности гидролизовать эскулин с образованием эскулетина, который в присутствии ионов железа образует коричнево-черный комплекс, что приводит к потемнению среды вокруг колоний. Ингибиторы подавляют рост сопутствующей микрофлоры.

2.2. Состав

Среда ПАЛ, г/л:

Панкреатический гидролизат рыбной муки ………………
Пептон ……………………………………………………….
Панкреатический гидролизат казеина (ПГК) ………………
Дрожжевой экстракт………………….………………………
Литий хлористый …................................................................
Эскулин ……………..………………………………………..
Железо (III) лимонноаммиачное зеленое или железо (III) лимонноаммиачное коричневое ……………….
Натрий хлористый ………..………………………………….
Натрий углекислый ………………………………………….
Агар микробиологический …….............................................

Состав СД, г/л:

3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Набор реагентов обеспечивает рост листерий не позднее 48 ч инкубации при температуре (37±1) °С и подавляет рост эшерихий, протеев и стафилококков.

4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ

· Термостат, обеспечивающий температуру 37 °С

· Автоклав

· Пипетки стеклянные, позволяющие отбирать объемы жидкости 1 и 2 мл

· Цилиндр стеклянный мерный вместимостью 1000 мл

· Чашки Петри

· Вода дистиллированная

· Воронки стеклянные

6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

Объекты исследований в клинической, санитарной и пищевой микробиологии.

7. Проведение АНАЛИЗа

7.1. Приготовление среды ПАЛ.

Препарат в количестве, указанном на этикетке, тщательно размешивают в 1 л дистиллированной воды, кипятят в течение 3 мин до полного расплавления агара, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и стерилизуют в автоклаве при температуре 121 °С в течение 15 мин.

7.1.1 Приготовление среды ПАЛ с селективной добавкой.

Содержимое флакона с селективной добавкой растворяют в 5 мл дистиллированной воды, тщательно перемешивают и вносят в стерильную, охлажденную до температуры 50-55 °С среду ПАЛ из расчета 5 мл на 1 л среды.

Готовая среда в чашках прозрачная желто-зеленого цвета.

Готовую среду, разлитую в чашки Петри, можно использовать в течение 7 суток при температуре хранения 2-8 °С.

7.2. Взятие, посев исследуемого материала проводят в соответствии с
ГОСТ Р 51921-2002 «Продукты пищевые. Методы выявления и определения бактерий Listeria monocytogenes», МУК 4.2.1122-02 «Организация контроля и методы выявления бактерий Listeria monocytogenes в пищевых продуктах».

7.3. Исследуемый материал засевают соответственно на две чашки Петри со средой ПАЛ и стерильным шпателем распределяют взвесь по поверхности среды. Инкубируют при температуре (37±1) ° С не более 48 ч.

8. УЧЕТ И РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ

Учет результатов проводят не позднее 48 ч инкубации посевов при температуре (37±1) ° С, визуально учитывая наличие и характер роста.

Колонии L. monocytogenes – мелкие, круглые, серо-желтого цвета, диаметром
0,4-1,2 мм с образованием вокруг колоний черной зоны.

Колонии L. ivanovi – мелкие, круглые, серо-желтого цвета, диаметром 0,2-1,0 мм с образованием вокруг колоний черной зоны.

Для получения достоверных результатов посевы образцов производить не менее чем в трех повторностях.

9. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ

Набор реагентов необходимо хранить в герметично закрытой упаковке в сухом защищенном от света месте при температуре от 2 до 30 С.

Срок годности набора реагентов: среды ПАЛ – 2 года, СД - не менее срока годности среды. Набор с истекшим сроком годности использованию не подлежит.

Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение настоящей инструкции по применению.

По вопросам, касающимся качества набора реагентов «Питательный агар для выделения листерий (среда ПАЛ)» в течение срока годности следует обращаться в адрес предприятия-изготовиОболенск, Московская обл ., Серпуховский р-н, ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии»,

*) Возможен выпуск набора реагентов в комплектации по требованию заказчика

П редназначен для выделения возбудителя листериоза из пищевых продуктов при их бактериологическом исследовании, клинического патологического материала человека и животных, санитарных посевов из объектов внешней среды, а также для культиви­рования музейных, производственных штаммов и культур, выделенных на обогатительных средах. Компонентный состав высоко селективен ввиду присутствия в нем добавок хлорида лития, цефтазидима, полимиксина В и акрифлавина.

Дифференцирующая способность среды обусловлена использованием 2 индикаторных систем: с эскулином и маннитом.

Дифференциально-диагностическая среда, на которой Listeria monocytogenes гидролизует эскулин на эскулетин и глюкозу. Реагируя с цитратом железа, эскулетин образует коричнево-черный комплекс, что приводит к потемнению среды вокруг колоний. Листерии не ферментируют маннит, поэтому сбраживающие маннит энтерококки и стафилококки формируют цветные колонии (от красного до желтого). Микроаэрофильные условия ограничивают рост аэробов, подобных представителям родов Bacillus и Pseudomonas.

Введение в состав среды яичного желтка (2,5%) способствует восстановлению поврежденных клеток. Добавление среды с кровью поверх PALCAM агара позволяет дифференцировать и подсчитать количество гемолитических листерий.

В зависимости от типа анализируемой пробы перед высевом на PALCAM агар должно быть проведено обогащение в том или ином бульоне для селективного обогащения

Состав среды: панкреатический гидролизат рыбной муки, панкреатический гидролизат казеина, натрий хлористый, пептон мясной, дрожжевой экстракт, литий хлористый, эскулин, железо лимонноамиачное зеленое или коричневое, натрий углекислый, натрий хлористый, агар, селективная добавка.

В виде гомогенного сухого, легко растворимого порошка светло-желтого цвета, светочувствителен.

Селективная добавка в виде мелкодисперсного порошка светло-розового цвета, светочувствительный.

Готовая среда желто-зеленого цвета, прозрачна, со слегка опалесцирующей поверхностью, по плотности соответствует 1,3% агаровому гелю.

Кислотность среды: при 25°С водный раствор (6,9% вес/об) имеет рН 7,0 ± 0,2.

Инструкция по применению питательного агара для выделения листерий ПАЛ.
Инструкция составлена на основе ГОСТ-Р 51921-2002 «Продукты пи­щевые. Методы выявления и определения бактерий Listeria monocyto-genes».

Питательный агар ПАЛ является селективно-диагностической средой и предназначен для выявления колоний бактерий Listeria monocytogenes.

ФОРМА ВЫПУСКА:

Среда выпускается в герметично укупоренных стеклянных флаконах по 200 и 400 мл. Селективная добавка к агару ПАЛ выпускается в уку­поренных пенициллиновых флаконах и рассчитана 1 литр среды.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ СРЕДЫ:

В асептических условиях вскрыть флакон и заменить резиновую пробку флакона на стерильную ватно-марлевую. Расплавить среду на водяной бане (не кипятить!), охладить до 48 – 50 °С, добавить селектив­ную добавку, согласно инструкции по применению добавки, и разлить в стерильные чашки Петри. Среда готова к применению.

ТЕХНИКА ИССЛЕДОВАНИЯ:

Посев на среду ПАЛ производят из пробирок с селективной средой для обогащения (ПБЛ II или бульон Фразера) после инкубации, незави­симо от наличия или отсутствия признаков роста, в том числе почерне­ния. Посев производят бактериологической петлей из культуральной жидкости на поверхность агара. Посевной материал распределяют по поверхности шпателем или наносят петлей в виде штриха. Допускает­ся проводить пересев параллельно на поверхность двух плотных се­лективно-диагностических сред (например, можно использовать до­полнительно ПАЛКАМ-агар или Оксфордский агар).

Посевы инкубируют при температуре 37 ± 1 °С в течение 24 - 48 ч.

После инкубирования чашки с посевами просматривают и отмечают рост характерных колоний.

На среде ПАЛ листерий через 24 часа инкубации образуют мелкие серовато-желтые колонии с черным ореолом диаметром от 1 до 2 мм. Посторонняя кокковая микрофлора образует выпуклые колонии лимонно-желтого цвета диаметром от 1 до 4 мм, окруженные слабым (или без него) покраснением питательной среды.

При появлении сплошного роста листерий проводят пересев бакте­риологической петлей из зон наибольшего почернения среды штриха­ми на поверхность двух чашек Петри с агаром ПАЛ для получения изо­лированных колоний.

При отсутствии роста характерных колоний листерий на агаре ПАЛ исследование прекращают и делают заключение об отсутствии Listeria monocytogenes в исследуемой пробе продукта.

УСЛОВИЯ И СРОКИ ХРАНЕНИЯ:

Срок годности питательной среды в прохладном, защищённом от све­та месте в герметично укупоренном флаконе - 6 месяцев.

Не вскрытый флакон с селективной добавкой хранится в рефрижера­торе при температуре до 8 О С в течение года.

Раствор селективной добавки хранится при 2 - 8 О С в течение 4 суток.

Чашки Петри с разлитой в них средой хранятся не более 22 суток в защищенном от света месте и при температуре не выше 8 О С.

Цена: 10 437.00 RUB

Вы можете добавить товар в корзину, указав количество

Производитель: Оболенск

Страна: Россия

Ед. изм.: набор

Упаковка: 250г

Вид упаковки: полиэтиленовая банка

Артикул: О72

Описание

Питательный агар для выделения и культивирования Listeria spp., сухой. Предназначен для выделения возбудителя листериоза из пищевых продуктов при их бактериологическом исследовании, клинического патологического материала человека и животных, санитарных посевов из объектов внешней среды, а также для культиви­рования музейных, производственных штаммов и культур, выделенных на обогатительных средах. Компонентный состав высоко селективен ввиду присутствия в нем добавок хлорида лития, цефтазидима, полимиксина В и акрифлавина (5 флаконов добавки в комплекте со средой). Дифференцирующая способность среды обусловлена использованием 2 индикаторных систем: с эскулином и маннитом

Функциональное назначение

Дифференциально-диагностическая среда, на которой Listeria monocytogenes гидролизует эскулин на эскулетин и глюкозу. Реагируя с цитратом железа, эскулетин образует коричнево-черный комплекс, что приводит к потемнению среды вокруг колоний. Листерии не ферментируют маннит, поэтому сбраживающие маннит энтерококки и стафилококки формируют цветные колонии (от красного до желтого). Микроаэрофильные условия ограничивают рост аэробов, подобных представителям родов Bacillus и Pseudomonas.
Введение в состав среды яичного желтка (2,5%) способствует восстановлению поврежденных клеток. Добавление среды с кровью поверх PALCAM агара позволяет дифференцировать и подсчитать количество гемолитических листерий.
В зависимости от типа анализируемой пробы перед высевом на PALCAM агар должно быть проведено обогащение в том или ином бульоне для селективного обогащения

Технические характеристики

Состав среды: панкреатический гидролизат рыбной муки, панкреатический гидролизат казеина, натрий хлористый, пептон мясной, дрожжевой экстракт, литий хлористый, эскулин, железо лимонноамиачное зеленое или коричневое, натрий углекислый, натрий хлористый, агар, селективная добавка.
В виде гомогенного сухого, легко растворимого порошка светло-желтого цвета, светочувствителен. Селективная добавка в виде мелкодисперсного порошка светло-розового цвета, светочувствительный.
Готовая среда желто-зеленого цвета, прозрачна, со слегка опалесцирующей поверхностью, по плотности соответствует 1,3% агаровому гелю.
Кислотность среды: при 25°С водный раствор (6,9% вес/об) имеет рН 7,0 ± 0,2.
Готовая среда пригодна в течение 7 суток при температуре хранения +2...8°С.
Форма выпуска: сухой порошок в полиэтиленовых банках по 250 г, селективная добавка во флаконах по 0,045 г.
Набор реагентов необходимо хранить в герметично закрытой упаковке в сухом защищенном от света месте при температуре +2...30°C.
Срок годности среды - 2 года с даты производства, указанной на упаковке. Срок годности добавки - не менее срока годности среды.
Регистрационное удостоверение № ФСР 2010/09162